三年连考生物知识点：微生物的分离和培养

　　2020年高考即将开战，你准备好了吗？对于高中生物成绩不好的同学来说，熟悉复习资料的积累要随时整理。高考网小编为各位考生整理了一些高考生物必备的知识点，供大家参考阅读！

　　一、目的要求

　　1、掌握各种分离、接种方法。

　　2、掌握无菌操作基本环节。

　　二、实验说明

　　微生物在自然界中呈混杂状态存在，要获得所需菌种，必需从中把它们分离出来。在保存菌种时不慎受到到污染也需予以分纯。微生物分离和纯化的方法很多，但基本原理却是相似的，即将待分离的样品进行一定的稀释，并使微生物的细胞（或孢子）尽量以分散状态存在，然后使其长成一个个纯种单菌落。然而上述工作又离不开接种，即将一种微生物移到另一灭过菌的培养基上的过程。

　　三、实验材料

　　1、恒温培养箱。

　　2、接种环、玻璃棒、吸管、酒精灯。

　　3、培养基（上次实验配制的）。

　　4、大肠杆菌、枯草杆菌、金黄色葡萄球菌、酵母菌。

　　四、方法步骤

　　（一）接种的操作

　　1、斜面接种（接金黄葡萄球菌）

　　（1）操作前，先用75%酒精擦手，待酒精挥发后点燃酒精灯。

　　（2）将菌种管和斜面握在左手大姆指和其它四指之间，使斜面和有菌种的一面向上，并处于水平位置。

　　（3）先将菌种和斜面的棉塞旋转一下，以便接种时便于拔出。

　　（4）左手拿接种环（如握钢笔一样），以火焰上先将环端烧红灭菌，然后将有可能伸入试管其余部位也过火灭菌。

　　（5）用右手的无名指、小指和手掌将菌种管和待接斜面试管的棉花塞或试管帽同时拔出，然后让试管口缓缓过火灭菌（切勿烧过烫）。

　　（6）将灼烧过的接种环伸入菌种管内，接种环在试管内壁或未长菌苔的培养基上接触一下，让其充分冷却，然后轻轻刮取少许菌苔，再从菌种管内抽出接种环。

　　（7）迅速将沾有菌种的接种环伸入另一支待接斜面试管。从斜面底部向上作“Z”形来回密集划线。有时也可用接种针仅在培养基的中央拉一条线来作斜面接种，以便观察菌种的生长特点。。

　　（7）迅速将沾有菌种的接种环伸入另一支待接斜面试管。从斜面底部向上作“Z”形来回密集划线。有时也可用接种针仅在培养基的中央拉一条线来作斜面接种，以便观察菌种的生长特点。

　　（8）接种完毕后抽出接种环灼烧管口，塞上棉塞。

　　（9）将接种环烧红灭菌。放下接种环，再将棉花塞旋紧。

　　2、液体接种

　　（1）由斜面培养基接入液体培养基，此法用于观察细菌的生长特性和生化反应的测定，操作方法与前相同，但使试管口向上斜，以免培养液流出接入菌体后，使接种环和管内壁磨擦几下以利洗下环上菌体。接种后塞好棉塞将试管在手掌中轻轻敲打，使菌体充分分散。

　　（2）由液体培养基接种液体培养基，菌种是液体时，接处除用接种环外尚用无菌吸管或滴管。接种时只需在火焰旁拔出棉塞,将管口通过火焰,用无菌吸管吸取菌液注入培养液内,摇匀即可。

　　3、平板接种

　　将菌在平板上划线和涂布。

　　（1）划线接种 见分离划线法。

　　（2）涂布接种 用无菌吸管吸取菌液注入平板后，用灭菌的玻棒在平板表面作均匀涂布。

　　4、穿刺接种

　　把菌种接种到固体深层培养基中，此法用于嫌气性细菌接种或为鉴定细菌时观察生理性能用。

　　（1）操作方法与上述相同，但所用的接种针应挺直。

　　（2）将接种针自培养基中心刺入，直刺到接近管底，但勿穿透，然后尚原穿刺途径慢慢拔出。